1.      原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的隱性孔雀石綠隱性結(jié)晶紫和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭孔隱性雀石綠抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物隱性孔雀石綠隱性結(jié)晶紫的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)隱性孔雀石綠隱性結(jié)晶紫的含量。
 
2.    試劑盒組成
（1）       96孔酶標(biāo)板：1塊。
（2）       標(biāo)準(zhǔn)品液:（1.0ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.4ppb、1.6ppb、6.4ppb、25.6ppb。
（3）       酶標(biāo)記物：    1瓶（12ml）。
（4）       抗體工作液：  1瓶（7ml）。
（5）       底物緩沖液：  1瓶（7ml）。
（6）       底物液：      1瓶（7ml）。
（7）       終止液：      1瓶（7ml）。
（8）       20倍濃縮洗液：（50ml）加蒸餾水稀釋到1000ml。
（9）       提取液A
（10）   提取液B
 
3.      需要但試劑盒中不提供的器材和試劑
（1）設(shè)備
…微孔板酶標(biāo)儀(450nm)
…均質(zhì)器
…振蕩器
…離心機
…各種量程的微量移液器
（2）試劑
…蒸餾水
…環(huán)已烷
 
4.      注意事項
（1）終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
（2）不要使用已過有效日期的隱性孔雀石綠檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內(nèi)容不可混用，以免降低靈敏度。
（3）0標(biāo)準(zhǔn)液的A450nm<0.6時，表示試劑可能變質(zhì)，請勿使用。
（4）顯色劑變藍(lán)，表明已變質(zhì)，請勿使用。
 
5.      儲存條件
（1）       2-8℃保存，切勿冷凍。
（2）       將不用的酶標(biāo)板放進(jìn)原袋中重新密封。
（3）       酶標(biāo)記物和顯色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
 
6.      樣品處理
（1）       魚/蝦樣品的準(zhǔn)備（稀釋倍數(shù)2）
A）魚蝦去皮取肉，用勻漿器均質(zhì)樣品；
B）稱取1.0g均質(zhì)好的樣品，放入15mL離心管中,加入0.5mL的提取液A,再加入1.5mL的提取液B，渦旋5-10分鐘；
C）3000rpm離心5分鐘，取上清，
D）取上清50μl進(jìn)行實驗。
（2）       水質(zhì)樣品（稀釋倍數(shù)1）
離心后取50μl作ELISA分析。
 
7.      免疫分析時試劑的準(zhǔn)備
（1）       注意事項
a) 使用之前將所有試劑平衡至室溫。
b) 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
c) 在使用中不要讓微孔干燥。
d) EIA分析的重復(fù)性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細(xì)按照推薦的洗板順序操作是EIA測定程序中的要點。
e)         在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
（2）濃縮洗滌液使用前應(yīng)根據(jù)所需量進(jìn)行20倍稀釋，即按1ml濃縮洗滌液加入19ml蒸餾水的比例進(jìn)行稀釋。
 
8.      測定程序
（1）       將標(biāo)